細針吸引によるイヌ口腔黒色腫の初代細胞培養の確立：腫瘍形成および癌進行研究のための新しいツール

Establishment of Primary Cell Cultures from Canine Oral Melanomas via Fine-Needle Aspiration: A Novel Tool for Tumorigenesis and Cancer Progression Studies.

抄録

口腔黒色腫はイヌで最も一般的な口腔悪性腫瘍であり、侵攻性、浸潤性、および予後不良を特徴とする。ヒトの口腔黒色腫と生物学的および遺伝学的に類似していることから、貴重な自然発生的比較モデルとなる。初代細胞培養は、腫瘍形成、癌の進行、および革新的な治療アプローチを研究するために、ヒト医学において、また最近では獣医学においても広く用いられている。本研究の目的は、低侵襲的サンプリング法として微細針吸引法を用い、口腔イヌメラノーマから2次元および3次元初代細胞株を樹立することである。この研究のために、4つの原発性口腔黒色腫と5つのリンパ節転移に代表される6頭のイヌからサンプルを採取した。細胞を消化して単細胞懸濁液を得、フラスコに播種し、あるいはマトリゲルで処理してオルガノイドを形成した。細胞培養は、Melan-A、PNL2、Sox-10に対する抗体を用いたフローサイトメトリーによって特徴づけられた。この技術は、特に外科的処置が不適格な患者にとって有益であり、粘膜黒色腫腫瘍学の比較研究に重要なin vitroモデルの確立を可能にする、細胞サンプルを得るための低侵襲な手段を提供する。われわれの知る限り、これは犬の細針吸引による腫瘍原細胞培養を確立した最初の研究である。

Oral melanomas are the most common oral malignancies in dogs and are characterized by an aggressive nature, invasiveness, and poor prognosis. With biological and genetic similarities to human oral melanomas, they serve as a valuable spontaneous comparative model. Primary cell cultures are widely used in human medicine and, more recently, in veterinary medicine to study tumorigenesis, cancer progression, and innovative therapeutic approaches. This study aims to establish two- and three-dimensional primary cell lines from oral canine melanomas using fine-needle aspiration as a minimally invasive sampling method. For this study, samples were collected from six dogs, represented by four primary oral melanomas and five lymph nodal metastases. The cells were digested to obtain single-cell suspensions, seeded in flasks, or processed with Matrigel to form organoids. The cell cultures were characterized through flow cytometry using antibodies against Melan-A, PNL2, and Sox-10. This technique offers a minimally invasive means to obtain cell samples, particularly beneficial for patients that are ineligible for surgical procedures, and enables the establishment of in vitro models crucial for comparative studies in mucosal melanoma oncology. To the best of our knowledge, this is the first work establishing neoplastic primary cell cultures via fine-needle aspiration in dogs.