筋ジストロフィーラットの網膜における網膜色素上皮から分泌されるタンパク質の免疫細胞化学的解析

Immunocytochemical characterisation of proteins secreted by retinal pigment epithelium in retinas of normal and Royal College of Surgeons dystrophic rats.

• H J Sheedlo
• J E Turner

抄録

先行研究では、網膜色素上皮（RPE）細胞から分泌されるタンパク質からなる抗原をヒツジに注入し、得られた抗血清の特異性をウェスタンブロッティングで示し、in vitroおよびin vivoで網膜の発育に及ぼす影響を調べた。本研究では、これらの分泌タンパク質の分布は、培養新生児ラットRPE細胞、正常ラットおよびロイヤルカレッジオブサージオン（RCS）ジストロフィーラットの網膜および正常成人ラットの大脳における光顕微鏡免疫細胞化学によって決定された。これらのRPE分泌タンパク質の免疫標識は、培養した正常ラットRPEと形質転換ラットRPEの核を取り囲む細胞質小胞とプロセス内で検出された。生後後期および成体ラットの網膜では、RPE細胞および神経節細胞体の細胞質に高密度の免疫染色が認められた。2-mold RCSジストロフィーラットの網膜では、RPEと神経節細胞に加えて、薄い外核層内に散在する光受容体やデブリゾーン内の小構造物も免疫反応性が高密度であった。2歳のRCSジストロフィーラットの網膜では、神経節細胞の数は減少していたが、RPE内の免疫反応は密度が高くなっていた。網膜内の他の神経細胞、すなわち双極性、アマクリン、水平性の神経細胞は、RPE分泌タンパク質に対して免疫反応性を示さなかった。成体ラットの大脳皮質では、RPE分泌タンパク質に対する免疫反応性は、主に錐体ニューロンの大脳辺縁部と顆粒ニューロンの小脳辺縁部で検出された。結論として、ラットRPE分泌タンパク質に対する抗血清の免疫細胞化学的解析を行った。この抗血清は、培養新生児の正常ラットRPEと形質転換ラットRPEの分泌物様小胞内のタンパク質を認識し、正常ラット網膜のRPEと神経節細胞（発生制御されていると思われる）、成体ラット大脳のニューロンペリカリアに特異性を示した。

In a previous study, an antigen consisting of proteins secreted by retinal pigment epithelial (RPE) cells was injected into a sheep and the specificity of the resulting antiserum was shown by Western blotting and its effects on retinal development were determined in vitro and in vivo. In the present study, the distribution of these secreted proteins was determined by light microscopy immunocytochemistry in cultured neonatal rat RPE cells and retinas of normal and Royal College of Surgeons (RCS) dystrophic rats and cerebrum of normal adult rats. Immunolabelling for these RPE-secreted proteins was detected in cytoplasmic vesicles surrounding nuclei and within processes of cultured normal and transformed rat RPE. In retinas of late postnatal and adult rats, dense immunostaining was found in the cytoplasm of RPE cells and ganglion cell bodies. In addition to RPE and ganglion cells, scattered photoreceptors within the thin outer nuclear layer and small structures within the debris zone were also densely immunoreactive in retinas of 2-mo-old RCS dystrophic rats. The numbers of immunostained ganglion cells appeared to decrease in retinas of older RCS rats, although the immunoreactivity within the RPE appeared to increase in density. No other neuron within the retina, i.e. bipolar, amacrine or horizontal, was immunoreactive for RPE-secreted proteins. In the cerebral cortex of adult rats, immunoreactivity for RPE-secreted proteins was primarily detected within large perikarya of pyramidal neurons and smaller granule neurons. In conclusion, we report an immunocytochemical analysis of an antiserum raised against secreted proteins of rat RPE. This antiserum recognised proteins within secretory-like vesicles of cultured neonatal normal and transformed rat RPE and showed a specificity for RPE and ganglion cells in normal rat retinas, that appeared to be developmentally regulated, and neuron perikarya in adult rat cerebrum.